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白三烯ELISA檢測試劑盒操作:全流程拆解,一步到位不踩坑!
  • 發(fā)布日期:2026-05-24      瀏覽次數(shù):35
    •   白三烯ELISA檢測試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附技術(ELISA)的高靈敏度定量檢測工具,專門用于測定生物樣本中白三烯(Leukotrienes,LTs)的濃度,包括LTB4、LTC4、LTD4、LTE4等關鍵亞型,廣泛應用于炎癥疾病研究、藥物開發(fā)及臨床診斷等領域。其核心原理是通過抗原-抗體特異性結合與酶催化顯色反應,實現(xiàn)目標分子的精準定量。

        白三烯ELISA檢測試劑盒的操作流程:

        1、試劑與樣本準備:

        試劑盒提前從2~8℃取出,置于室溫(20~25℃)平衡15~30分鐘。

        濃縮洗滌液若有結晶,可40℃水浴助溶后再按比例(如20倍/30倍)稀釋成工作液。

        標準品按說明書逐級稀釋(如0、15、30、60、120、240 pg/mL等濃度梯度);樣本若需稀釋(如5倍),按相應比例用樣本稀釋液混勻。

        樣本(血清、血漿、上清等)避免反復凍融,且不能含有疊氮鈉(NaN?),因其會抑制HRP活性。

        2、加樣:

        取所需酶標板條,設空白孔(僅加稀釋液或空白)、標準品孔(各濃度50μL)、待測樣本孔(先加稀釋液40μL + 樣本10μL,或直接加100μL,依說明書)。

        加樣時將 tip 靠于孔底,避免產生氣泡,輕輕混勻(勿觸及孔壁)。

        第一抗體/酶結合物孵育:

        除空白孔外,每孔加酶標試劑(HRP標記的檢測抗體,通常100μL),封板膜封好。

        37℃恒溫箱或水浴孵育30~60分鐘(具體時間見說明書)。

        3、洗滌:

        揭掉封膜,棄液體,甩干。每孔加滿洗滌液(約300~350μL),靜置1分鐘,甩干,在吸水紙上拍干。

        重復洗滌3~5次(手工或洗板機)。

        4、顯色:

        每孔依次加顯色劑A 50μL、顯色劑B 50μL,輕輕振蕩混勻。

        37℃避光顯色10~15分鐘(肉眼可見標準孔呈藍色梯度)。

        5、終止與讀數(shù):

        每孔加終止液50μL(藍色立轉黃色),15分鐘內用酶標儀在450nm波長(有時加630nm參比)測定各孔OD值。

        以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線,代入樣本OD值算出濃度,再乘以稀釋倍數(shù)即為實際濃度。
       

       

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