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導(dǎo)致細胞生長緩慢的常見原因
  • 發(fā)布日期:2021-09-24      瀏覽次數(shù):3569
    •   導(dǎo)致細胞生長緩慢的常見原因:
       
        一、培養(yǎng)基可能缺乏細胞生長所需的某種因子,出現(xiàn)這種情況一般都是小伙伴們購買細胞后沒有按照ATCC或國內(nèi)細胞庫的方法配制培養(yǎng)基,就使用實驗室?guī)熜謳熃阌玫呐囵B(yǎng)基去養(yǎng)細胞。處理方法一般來說就是按照方法配制培養(yǎng)基,或是直接購買所養(yǎng)細胞專用的培養(yǎng)基。
       
        二、細菌、支原體、真菌等污染:雖然現(xiàn)在培養(yǎng)基里面一般都會添加雙抗(和),但是如果無菌操作觀念不強,依然很有可能導(dǎo)致污染。處理方法:如果有凍存的細胞,就可以把污染的細胞丟棄處理,當然,丟棄不是隨意扔進垃圾桶就可以了,要按照實驗室生物安全規(guī)范操作進行。然后重新復(fù)蘇培養(yǎng),建議把培養(yǎng)箱進行全面的消毒處理。若是沒有凍存,而這種細胞又是很珍貴的,常見的處理方法就是藥物處理:細菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染就加抗真菌藥物;支原體污染就加抗支原體藥物,具體藥物可以咨詢相關(guān)公司的技術(shù)支持,他們會比較專業(yè)。
       
        三、很多細胞的生長存在密度依賴性,如果傳代后,細胞的密度太小,也是會影響到細胞生長的。這個時候沒什么特別好的處理辦法,只得勤換液。如果細胞培養(yǎng)瓶使用的是T75倒可以消化、離心、重懸,然后接種到T25的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
       
        四、凍存細胞DMSO(二甲基亞砜)加的量不正確,沒有逐步梯度降溫。下次復(fù)蘇后的細胞總是長不好。處理方法:按照的凍存方式配制凍存液。有的細胞適合10%的DMSO,有的細胞適合5%;嚴格遵守逐步梯度降溫原則,細胞復(fù)蘇時快速解凍。
       
        五、換液間隔時間太長,有的小伙伴養(yǎng)細胞真的很“佛系”,想起了就去換個液,信奉一句話“你已經(jīng)是成熟的細胞了,應(yīng)該學(xué)著自己覓食,成長”。這種情況下細胞培養(yǎng)瓶中就會積累很多細胞代謝廢物,影響細胞活性。建議:勤換液
       
        六、細胞“消化”時間過長,對細胞造成損傷;另外中一般會添加EDTA,螯合鈣離子,影響細胞貼壁。處理方法:控制好細胞“消化”時間,盡量去除干凈和其中的EDTA.
       
        七、PH:細胞需要在一定的PH值下生長,這個道理小伙伴們都懂。但是很多時候PH都是我們忽略的,也是小編今天要強調(diào)的一點。我們使用的培養(yǎng)基可能會隨著使用時間的加長而緩慢變堿哦!(當然,也有可能會變酸,但常見的是變堿),一般來說,過堿的培養(yǎng)基會影響到細胞生長。處理方法:簡單的就是換新鮮培養(yǎng)基唄!當然,如果有時間和有條件也可以調(diào)一調(diào)培養(yǎng)基的PH值。
       
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