公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Phospho-MEF2A (Thr312)： 0酸化肌細胞增強因子2抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0223SW480(人結(jié)腸癌細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠唾液酸酶2(SIAL2)ELISA試劑盒 sCD40L(Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand)  人可溶性CD40配體 96T

Phospho-MEF2A (Ser408)： 0酸化肌細胞增強因子2抗體 tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-1D3

QG-56(人肺扁平上皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2 L-02(正常肝細胞) 大鼠唾液α1(AMY1)ELISA試劑盒 a-Glu  大鼠α葡萄糖苷酶 96T

phospho-MEK1 (Thr286)： 0酸化原活化蛋白激酶激酶1抗體 小鼠畸胎瘤細胞;P19

小鼠胚胎成纖維細胞;3T6-Swiss albino 人型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA 試劑盒 lamin A 核纖層蛋白A抗原 0.5mg

phospho-ITGB4(Tyr1530)： 0酸化整合素β4抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1022

OVCAR-3(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 人轉(zhuǎn)酶/谷轉(zhuǎn)酶(ALT/GPT)ELISA 試劑盒 LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體 0.5mg

IGFBP1： 結(jié)合蛋白1抗體 人羊膜上皮細胞HAmEpiC

CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 人基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒 LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原 0.5mg

KYSE-410人食道鱗狀細胞癌CL-0434SC-1(小鼠胚胎細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素受體(ACTHR)ELISA試劑盒 Hyl(Human hydroxylysine)  人羥賴酸 96T

RNF126： 環(huán)指蛋白126抗體 IDS Others Human 人 Iduronate 2-Sulfatase / IDS 人細胞裂解液 (陽性對照)

人結(jié)腸平滑肌細胞RNAHCSMC miRNA5 μg 大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒 GAP(Human GTPase activating protein)  人GTP酶活化蛋白 96T

RBC(G2H4)： 小鼠抗人紅細胞單克隆抗體 恒河猴腎細胞;LLC-MK2

人胚肺細胞VA13細胞;WI-38 VA13亞系2RA 人直結(jié)腸平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒 Apo-H(Human Apolipoprotein H)  人載脂蛋白H 96T