公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Mafa： v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體 小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02

RAG(小鼠腎腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 H08910(卵巢癌細(xì)胞) 大鼠頭蛋白(NOG)ELISA試劑盒 vaspin ELASA Kit 大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸抑制劑 96T

MMP-10： 基質(zhì)金屬-10抗體 人胃癌細(xì)胞;MGC-803

CF Protein Mouse 重組小鼠 CF / Ciliary Neuroophic Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠銅藍(lán)蛋白(CP)ELISA試劑盒 NGF- Beta(Human Nerve growth factor- Beta)  人的神經(jīng)生長因子-β 96T

Mtp53(N235K N239Y)： 突變型P53抗體 HK3 Others Human 人 Hexokinase-3 / HK3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

ITGA11： 整合素α11抗體 人軟骨細(xì)胞HC-a

CCL22 Protein Human 重組人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人保護(hù)素(CD59)ELISA試劑盒 CD122/IL-2RB(Imterleukm-2 Receptor beta) CD122/白介素2受體β鏈抗原 0.5mg

IGFL2： 胰島素生長因子樣家族成員2抗體 DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人胞漿型0脂酶A2(cPLA2)ELISA 試劑盒 MIP2 (myocardial ischemic preconditioning upregulated protein 2) 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2抗原 0.5mg

IDI2： 異戊烯基焦0酸異構(gòu)酶2抗體 羅猴胎腎細(xì)胞;MA104 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，C6細(xì)胞 NCI-H446 [H446](小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

Li-7人肝癌細(xì)胞Phospho-P105 RB (Ser788)： 0酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 TNFRSF14 Others Human 人 TNFRSF14 / HVEA / HVEM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞RNAHOPC miRNA5 μg 大鼠雌激素受體(ER)ELISA 試劑盒 PLP(Human proteolipid protein)  人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO C1008 (E6)

人胚肺細(xì)胞系;KuMA 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠雌激素(E)ELISA試劑盒 VMA(Human vanillylmandelic acid)  人垂草扁桃酸 96T

phospho-RPS6KB1(Ser427)： 0酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 骨骼肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元 大鼠雌激素(E)ELISA 試劑盒 GKRP(Human glucokinase regulatory protein)  人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白 96T