公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

商品屬性

產(chǎn)品介紹：

儲(chǔ)存條件：

TRzol LS 在室溫下能穩(wěn)定保存 12 個(gè)月。盡管如此，為達(dá)到效果，我們建議保存在 2-8°C 的環(huán)境下。

重要提示：

有毒物接觸皮膚或者不慎吞服，會(huì)導(dǎo)致灼傷。一旦接觸皮膚后立即以大量的洗滌劑和清水清洗。若感不適，看醫(yī)生并尋求苯和其他成分的正確治療方案。

TRzol LS試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層、中間層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA可以通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)回收。無(wú)論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌，該方法對(duì)少量及大量的組織和細(xì)胞均有較好的分離效果。TRzol LS 試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品。所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。TRzol 抽提的總 RNA 能夠避免DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+篩選、體外翻譯、RNA 酶保護(hù)分析和分子克隆。如果是用于 PCR，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時(shí)，建議用擴(kuò)增級(jí)的DNase I 來(lái)處理抽提的總RNA。

注意事項(xiàng)：

1.從少量的組織(1~10mg)或細(xì)胞(10 2-10 4 個(gè))中分離RNA 樣品：往組織或細(xì)胞中加 入 800µl TRzol。待樣品裂解后，加入氯仿并進(jìn)行步驟 2 中的抽提操作。在用異丙醇沉 淀 RNA 之前，加入 5~10μg 無(wú) RNA 酶的glycogen 作為水樣層的載體。為降低其黏度 在加入氯仿前用 26 號(hào)注射器抽吸兩次以切斷基因組DNA。Glycogen 會(huì)留在水樣層中 并和 RNA 共析出。在濃縮到 4mg/ml 之前它不會(huì)抑制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)鏈的合成也不會(huì) 抑制 PCR。

2.在勻漿化后和加入氯仿之前，樣品可以在-60℃或者-70℃保存至少一個(gè)月。將 RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。

3.用 TRzol LS 抽提 RNA 時(shí)要戴手套和護(hù)眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學(xué)通 風(fēng)櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無(wú)例外，室溫保持在 15~30℃的條件下。

自備試劑：

氯仿 、 異丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（將水加入 無(wú) RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置過(guò)夜并高壓滅菌）。0.5% SDS 溶液(RNase-Free water 配制)（可選）。

操作步驟：

1.樣品預(yù)處理 a.生物液體 每0.25ml液體樣品(血清，血漿等等)加入0.75ml TRzol LS，用加樣槍吹打液體樣品 幾次以幫助裂解樣品中細(xì)胞。每5~10×10 6個(gè)細(xì)胞至少加入0.75ml TRzol LS。對(duì)于含有高 污染物樣品如全血樣品，可以用滅菌水按照1：1比例稀釋一倍后開(kāi)始提取。TRzol LS 和液體樣品的終體積比總是3：1。 b.組織 用glass或強(qiáng)力勻漿器攪勻組織樣品，每50~100mg組織或者0.25ml組織懸液加 0.75ml的TRzol LS。一般50~100mg組織體積都要小于0.25ml，如果組織樣品的體積小 于0.25ml，加入滅菌水將組織樣品體積調(diào)整到0.25ml以保證體積比例是3：1。 c.單層生長(zhǎng)的細(xì)胞 直接往直徑3.5 cm的培養(yǎng)板中加入0.3ml-0.4ml的TRzol LS溶解細(xì)胞，用加樣槍吹打 幫助充分裂解細(xì)胞。依據(jù)培養(yǎng)板的面積而不是依據(jù)細(xì)胞的數(shù)量來(lái)決定所需的TRzol LS 量 （每10cm2加0.3-0.4ml）。不需要往裂解物里面加水，因?yàn)榕囵B(yǎng)板中附著殘留的培養(yǎng)液 已經(jīng)充分稀釋了TRzol LS 。 d.懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞 通過(guò)離心來(lái)沉淀細(xì)胞。在TRzol LS試劑中用移液管反復(fù)吹打來(lái)裂解細(xì)胞。每 5~10×10 6的動(dòng)物細(xì)胞，植物或酵母菌細(xì)胞或每1×10 7細(xì)菌加0.75ml的TRzol LS。和步驟 b 一樣用滅菌水調(diào)節(jié)樣品體積到0.25ml。在加入TRzol LS前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞，因?yàn)槟?樣會(huì)增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細(xì)菌可能需要使用勻漿器。 2.分離階段 將勻漿樣品在15-30°C條件下孵育5min以使核蛋白體分解。每0.75ml TRzol LS 加0.2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手用力搖晃試管15秒并將其在室溫下孵育2~15 min。 在2~8°C下以不超過(guò)12,000×g的離心力高速冷凍離心15 min。離心后混合物分成三層： 下層苯-氯仿層，中間層，上層無(wú)色的水樣層。RNA無(wú)一例外地存在于水樣層當(dāng)中。 水樣層的容量大約為所加TRzol LS 容量的70%。

2.RNA 的沉淀 將水樣層轉(zhuǎn)移到一干凈的試管中，如果希望分離DNA和蛋白，有機(jī)層和中間層同 樣要予以保留。通過(guò)將水樣層和異丙醇混合來(lái)沉淀RNA。每0.75ml TRzol LS對(duì)應(yīng)0.5ml 異丙醇。將混合的樣品在15-30°C條件下孵育10min并在2~8°C下以不超過(guò)12,000×g的離 心力高速冷凍離心10 min。RNA沉淀在離心前通常不可見(jiàn)，離心后會(huì)形成一膠狀片狀 沉淀附著于試管壁和管底。

3.RNA 的漂洗 移去上層懸液。用75%的乙醇(RNase-Free water配制)洗滌RNA沉淀一次，每0.75ml 的TRzol LS至少加1ml的75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2~8°C下以不超過(guò)7,500×g的 離心力高速冷凍離心5 min。

4.RNA 的再溶解 室溫簡(jiǎn)單干燥 RNA 沉淀，不要在真空管里離心干燥 RNA。尤為重要的是，不能讓 RNA 沉淀干燥那樣會(huì)極大地降低它的可溶性。部分溶解的 RNA 樣品其 OD260 /OD280 比值<1.6 。用移液管分幾次移取 RNase-Free water 或 0.5%SDS 溶液 (RNase-Free water 配制)來(lái)溶解RNA（如果RNA 以后要用于酶切反應(yīng)時(shí)，避免使用SDS。） RNA 還能被 甲酰胺（除去離子）再溶解并保存在-70°C。

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